大豆及谷物中氟磺胺草醚殘留量的測定液相色譜法

1　范圍

本標準規定了大豆及谷物中氟磺胺草醚殘留量的液相色譜測定方法。
本標準適用于大豆及谷物中氟磺胺草醚殘留量的測定。

2　原理

樣品中氟磺胺草醚在酸性條件下用有機溶劑提取，經液-液分配及柱凈化除去干擾物質后，以液相色譜-紫外檢測器測定，根據色譜峰的保留時間定性，外標法峰高定量。

3　試劑

3.1　甲醇（色譜純）。
3.2　乙醚:重蒸餾。
3.3　三氯甲烷。
3.4　凈化柱:硅鎂吸附劑色譜預處理小柱，使用前先用5mL三氯甲烷淋洗。
3.5　鹽酸（83mL/L）:吸取8.3mL濃鹽酸，加水稀釋至100mL。
3.6　氫氧化鈉溶液（4.0g/L）:稱取0.4g氫氧化鈉，溶于水中，稀釋至100mL。
3.7　硫酸鈉溶液（20g/L）:稱取20g硫酸鈉，溶于水中，稀釋至1000mL，用氫氧化鈉溶液（3.6）調pH=11。
3.8　丙酮溶液:取980mL丙酮（重蒸餾），加20mL鹽酸。
3.9　甲醇+三氯甲烷（3+7）。
3.10　液相色譜流動相（甲醇+0.01mol/L乙酸鈉=60+40 pH=3.0）:稱取0.544g結晶乙酸鈉（ *H3COONa·3H2O），溶于水中，稀釋至400mL,加600mL甲醇（3.1），混勻，SC磷酸（優級純）調pH=3.2,經0.5μm濾膜過濾，超生波脫氣。流速1.0mL/min。
3.11　氟磺胺草醚標準儲備溶液:準確稱取氟磺胺草醚0.10000g，置于100.0mL容量瓶中。加甲醇（3.1）溶解后定容至刻度；此溶液1.00mL含1.00mg氟磺胺草醚。
3.12　氟磺胺草醚標準中間溶液:吸取5.0mL氟磺胺草醚標準儲備溶液（3.11）于50.0mL容量瓶中，加甲醇（3.1）定容至刻度；此溶液1.00mL含100.0μg氟磺胺草醚。

4　儀器

4.1　液相色譜儀
4.1.1　紫外波長檢測器:測定波長290nm,0.04 AUFS。
4.1.2　色譜柱:十八烷基硅膠鍵合相，柱長200mm,內徑4.6mm。
4.2　振蕩器。
4.3　電熱恒溫水浴。
4.4　具塞三角瓶:250mL。
4.5　過濾器具:玻璃砂芯漏斗（G3，100mL），抽濾瓶（100mL）。
4.6　分液漏斗:250mL。
4.7　玻璃注射器:10mL。

5　分析步驟

5.1　樣品處理
5.1.1　提取:將樣品粉碎過20目篩、混勻。稱取約20g試樣，至0.001g，置于三角瓶（4.4）中，加入100mL丙酮溶液（3.8），于振蕩器上振搖15min，靜置分層，取上層溶液用過濾器具（4.5）過濾。
5.1.2　凈化:量取60mL濾液于分液漏斗中，加入100mL硫酸鈉溶液（3.7），用氫氧化鈉溶液（3.6）調pH=10-11，加入50mL乙醚振搖，靜置分層，棄去上層乙醚。
下層溶液用鹽酸溶液（3.5）調pH=1-2，加入50mL乙醚振搖2min，靜置分層，收集乙醚層，下層溶液再用50mL乙醚振搖一次，合并乙醚層，靜置15min，排凈水層，放入蒸發皿中，置于電熱恒溫水浴上蒸至盡干。
用6mL三氯甲烷分三次溶解殘渣，合并移入已接好凈化柱（3.4）的注射器（4.7） 中，推動注射器使樣液緩慢通過凈化柱，用10L三氯甲烷淋洗　凈化柱，棄去淋洗液， 用20mL甲醇+三氯甲烷（3.9）洗脫，收集洗脫液于蒸發皿中，置于電熱恒溫水浴上蒸至盡干，用少量甲醇（3.1）多次溶解殘渣于刻度離心管中，zui終定容至1.0mL供液相色譜分析。
5.2　測定
5.2.1　液相色譜參考條件:見3.10，4.1。
5.2.2　繪制校準曲線:分別吸取0.5、1.0、2.0、4.0、8. *mL氟磺胺草醚標準中間溶液（3.12）于5支100.0mL容量瓶中，加甲醇（3.1）稀釋至刻度， 4K標準系列的氟磺胺草醚濃度分別為0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μg/mL。取各濃度標準10μL進樣，以氟磺胺草醚的濃度為柄坐標，峰高為縱坐標繪制校準曲線。
5.2.3　校準曲線:氟碘胺草醚校準曲線見附圖1中圖1。
5.2.4　色譜分析:取10μL樣品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜峰的保留時間和峰高， 用保留時間確定氟碘胺草醚，根據峰高，從校準曲線上查出氟碘胺草醚含量。
5.2.5　色譜圖:氟磺胺草醚標準色譜圖見附圖1中圖2。

6　結果

6.1　計算

C1 . V0
C=------------------------- 
V1 
m . -------
Va

式中: C—樣品中氟磺胺草醚的含量，mg/kg。
C1—相當于標準的含量，μg/mL。
V0—凈化液定容體積，mL。
V1—量取過濾溶液體積，mL。
V2—提取溶液體積，mL。
m—試樣的質量,g。

6.2　精密度和準確度
對添加氟磺胺草醚濃度范圍0.05～0.25mg/kg的大豆、玉米、高梁、小麥、大米等樣品進行重復測定，相對標準差為3.8～9.0%，回收率為88.0～97.5%。 
6.3　檢出限和標準曲線線性范圍
 儀器檢出限2.0ng，方法檢出限0.02mg/kg。標準系列濃度0.5μg/mL～32.0μg/mL其相關系數r=0.99998。